2 - [[2-etoxi-4- (4-hidroxi-1-piperidinil) fenil] amino] -5,11-di-hidro-5,11-dimetil-6H-pirimido [4,5-b] [1,4 ] benzodiazepin-6-ona CAS 1234480-50-2

Descrição do Produto

Nome do produto: 2 - [[2-etoxi-4- (4-hidroxi-1-piperidinil) fenil] amino] -5,11-di-hidro-5,11-dimetil-6H-pirimido [4,5-b] [ 1,4] benzodiazepin-6-ona CAS NO: 1234480-50-2

Sinônimos:

XMD 8-92 (base livre);

6H-Pirimido [4,5-b] [1,4] benzodiazepin-6-ona, 2 - [[2-etoxi-4- (4-hidroxi-1-piperidinil) fenil] amino] -5,11-di-hidro -5,11-dimetil-;

Amp;&químico; Propriedades físicas

Aparência: pó branco a esbranquiçado

Ensaio: ≥98,0%

Densidade: 1,3 g / cm3

Ponto de ebulição: 741,8 ℃ a 760 mmHg

Ponto de inflamação: 402,4 ℃

Em vitro

XMD8-92 exibe a maior afinidade para BMK1 com uma constante de dissociação medida (Kd) de 80 nM, enquanto DCAMKL2, TNK1 e PLK4 exibem Kd's de 190, 890 e 600 nM, respectivamente. O XMD8-92 é perfilado contra todas as cinases detectáveis ​​nos lisados ​​de células HeLa usando o método KiNativ e é cerca de 10 vezes mais seletivo para BMK1 com um IC50 de 1,5 μM do que os fora de alvo mais potentes, TNK1 (IC50=10 μM ) e ACK1 (também conhecido como TNK2, IC50=18 μM). Outros alvos externos fracos incluem o domínio quinase 2 de RSK1 e RSK2, PIK4A e PIK4B e FAK. Notavelmente, MEK5 não é significativamente inibido por XMD8-92 em até 50 μM [1]. XMD8-92 mostra alta seletividade a BMK1 em um ensaio de ligação in vitro à ATP no local de competição contra 402 quinases, bem como no método KiNativ contra todas as quinases detectáveis ​​nos lisados ​​de células HeLa. O XMD8-92 bloqueia a ativação da BMK1 induzida por EGF com IC50 de 240 nM e, com concentrações tão altas quanto 5 μM, o XMD8-92 não tem efeito inibitório na ativação do ERK1 / 2 pelo EGF [2].

Na Vivo

XMD8-92 inibe significativamente o crescimento do tumor in vivo em 95%. A farmacocinética de XMD8-92 é avaliada em ratos Sprague-Dawley, dada uma dose intravenosa ou oral única. Verificou-se que o XMD8-92 possui uma folga de meia vida de 2,0 horas de 26 mL / min / kg. XMD8-92 tem distribuição moderada de tecido com um volume calculado de distribuição de 3,4 L / kg. O XMD8-92 possui alta biodisponibilidade oral, com 69% da dose absorvida. Após uma dose oral única de 2 mg / kg, são observadas concentrações plasmáticas máximas de aproximadamente 500 nM por 30 minutos, com 34 nM restantes 8 horas após a dose. Em experimentos de tolerabilidade, altas concentrações plasmáticas de fármaco (aproximadamente 10 μM após a dose IP de 50 mg / kg) são mantidas ao longo dos 14 dias. O XMD8-92 parece ser bem tolerado e os camundongos pareciam saudáveis, sem sinais de angústia. Nenhuma instabilidade da vasculatura é observada nos camundongos tratados com XMD8-92 [1]. O tratamento com XMD8-92 em camundongos imunocompetentes e imunodeficientes bloqueou o crescimento de tumores de xenoenxerto de pulmão e cervical, respectivamente, em 95%. Esse notável efeito antitumoral do XMD8-92 nos modelos de tumor do xenoenxerto pulmonar e cervical é devido à capacidade do XMD8-92 de inibir a proliferação de células tumorais através da proteína de ponto de verificação p21 induzida pela supressão de PML e pelo bloqueio da contribuição do BMK1 na angiogênese associada ao tumor . Além disso, o nocaute de BMK1 (KO) em camundongos leva à remoção completa e irreversível da proteína BMK1, enquanto o tratamento com XMD8-92 em camundongos suprime apenas a atividade de BMK1, que é reversível. Segundo, a instabilidade da vasculatura observada em camundongos BMK1 KO pode ser devida à falta do domínio não cinase C-terminal da BMK1, que ainda está presente durante o tratamento com animais XMD8-92 [2].

Ensaio de quinase

A criação de perfil KiNativ de XMD8-92 é realizada com um ATP e ADP acilfosfato-destiobiotina com as seguintes modificações. Os lisados ​​de células HeLa (5 mg / mL de proteína total) são incubados na presença de XMD8-92 a 50 μM, 10 μM, 2 μM, 2 μM, 0,8 μM e 0 μM por 15 minutos antes da adição da sonda de acilfosfato de ATP ou ADP ( Concentração final da sonda de 5 μM). Todas as reações são realizadas em duplicado. As reações da sonda prosseguiram por 10 minutos e a reação foi interrompida pela adição de uréia e processada para análise por EM. As amostras são analisadas por LC-MS / MS em um espectrômetro de massa de armadilha de íons lineares usando uma "lista de alvos" segmentada no tempo projetada para coletar espectros de MS / MS de todos os conjugados de peptídeos-sonda de quinase que podem ser detectados nos lisados ​​de células HeLa. Esta lista de alvos é gerada e validada por uma análise exaustiva prévia dos lisados ​​HeLa. Até quatro íons de fragmentos característicos para cada conjugado de peptídeo-sonda de quinase são usados ​​para extrair sinais para cada quinase, e uma comparação de inibidor tratado para controlar lisados ​​(não tratados) permite a determinação precisa da% de inibição em cada ponto. Um manuscrito descrevendo os detalhes dessa abordagem de espectrometria de massa direcionada está em preparação [1].

Animal Admin

Camundongos [1] as células HeLa 5 × 105 são ressuspensas em DMEM e injetadas subcutaneamente no flanco direito dos ratos Nod / Scid de 6 semanas de idade (dia 0). No segundo dia (dia 1) após a injeção das células tumorais, os ratos são randomizados em 2 grupos (6 animais, XMD8-92, 1-28 dias e 18 animais, controle). O grupo XMD8-92 (1-28 dias) é tratado com XMD8-92 na dose de 50 mg / kg duas vezes ao dia por via intraperitoneal. O grupo controle recebe injeções diárias da solução transportadora como controle. No dia 7, o grupo controle é randomizado em 2 grupos (6 animais, XMD8-92, 7-28 dias e 12 animais, controle). E no dia 14, o restante grupo controle é randomizado em 2 grupos (6 animais, XMD8-92, 14-28 dias e 6 animais, controle). O tratamento com XMD8-92 nos grupos XMD8-92 (7-28 dias) e XMD8-92 (14-28 dias) é iniciado nos dias 7 e 14, respectivamente. O tamanho do tumor é medido usando um paquímetro, e o volume do tumor é determinado [1].

Referências:

[1] Yang Q, et al. A inibição farmacológica da BMK1 suprime o crescimento do tumor através da proteína da leucemia promielocítica. 14 de setembro de 2010; 18 (3): 258-67.

[2] Yang Q, et al. Visando a via BMK1 MAP quinase em terapia de câncer. Clin Cancer Res. 1 de junho de 2011; 17 (11): 3527-32.

[3] Umapathy G, et al. A quinase ALK estimula a quinase ERK5 a promover a expressão do oncogene MYCN no neuroblastoma. Sinal Sci. 28 de outubro de 2014; 7 (349): ra102.

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